protocolo de citometría

Protocolo de tinción por citometría de flujo (FACS) (tinción de la superficie celular)

• Coseche, lave las células (suspensión de células individuales) y ajuste el número de células a una concentración de 1-5x106 células / ml en tampón FACS helado (PBS, BSA al 0,5-1% o FBS al 5-10%, azida sódica NaN3 al 0,1% *). ). ...
• Añada 100 μl de suspensión celular a cada tubo..

1. ¿Para qué se utiliza la citometría de flujo??
2. ¿Cuál es el principio de la citometría de flujo??
3. ¿Qué puede medir la citometría de flujo??
4. ¿Cómo se tiñen las células para la citometría de flujo??
5. ¿Puede la citometría de flujo detectar células muertas??
6. ¿Puede la citometría de flujo detectar leucemia??
7. ¿Por qué se utiliza la luz láser en la citometría de flujo??
8. ¿Cómo se usa la citometría de flujo en hematología??
9. ¿Cómo se representan los datos de citometría de flujo??
10. ¿Puede la citometría de flujo detectar linfoma??
11. ¿Cuánto tiempo tardan los resultados de la citometría de flujo??
12. ¿Cómo se compensa la citometría de flujo??

¿Para qué se utiliza la citometría de flujo??

La citometría de flujo es un método de laboratorio que se utiliza para detectar, identificar y contar células específicas. Este método también puede identificar componentes particulares dentro de las células. Esta información se basa en características físicas y / o marcadores llamados antígenos en la superficie celular o dentro de las células que son exclusivos de ese tipo de célula..

¿Cuál es el principio de la citometría de flujo??

El principio básico de la citometría de flujo es el paso de células en una sola fila frente a un láser para que puedan ser detectadas, contadas y clasificadas. Los componentes celulares se etiquetan con fluorescencia y luego se excitan con el láser para emitir luz en diferentes longitudes de onda..

¿Qué puede medir la citometría de flujo??

La citometría, en su forma más pura, es la medición de las características celulares, que pueden incluir el tamaño celular, el recuento celular, el ciclo celular y más. Esta técnica permite a los investigadores obtener información muy específica sobre células individuales..

¿Cómo se tiñen las células para la citometría de flujo??

Diluya el reactivo secundario marcado con fluorocromo apropiado en 100 µL de tampón de tinción para citometría de flujo y agréguelo a las células. Incubar durante al menos 30 minutos a 2-8 ° C o en hielo. Proteger de la luz. Lave las células agregando tampón de tinción para citometría de flujo.

¿Puede la citometría de flujo detectar células muertas??

La pérdida de la integridad de la membrana es un indicador definitivo de muerte celular en los ensayos de citometría de flujo. Las células que excluyen un tinte de células muertas se consideran viables, mientras que las células con una membrana comprometida permiten que el tinte del interior de la célula manche un componente interno, identificando así la célula como muerta..

¿Puede la citometría de flujo detectar leucemia??

La inmunofenotipificación por citometría de flujo se puede realizar en sangre, médula ósea u otras muestras para proporcionar esta información adicional. Puede detectar células normales y células anormales cuyo patrón de marcadores se observa típicamente con tipos específicos de leucemia y linfoma..

¿Por qué se utiliza la luz láser en la citometría de flujo??

Los láseres se utilizan en citometría de flujo como fuente de excitación de muestras de células marcadas con fluoróforo. A menudo, se necesitan múltiples colores láser para caracterizar múltiples propiedades celulares..

¿Cómo se usa la citometría de flujo en hematología??

La citometría de flujo se ha utilizado para identificar y fenotipar con precisión los glóbulos rojos del receptor (44). La citometría de flujo se utiliza cada vez más en el banco de sangre para evaluar la contaminación por leucocitos en hemoderivados con leucocitos reducidos (45) (46).

¿Cómo se representan los datos de citometría de flujo??

Los datos de citometría de flujo se representan típicamente de una de dos maneras: histogramas, que miden o comparan un solo parámetro, y gráficos de puntos que comparan 2 o 3 parámetros simultáneamente en un gráfico de dispersión bidimensional o tridimensional..

¿Puede la citometría de flujo detectar linfoma??

La citometría de flujo puede diagnosticar el linfoma de Hodgkin clásico en los ganglios linfáticos con alta sensibilidad y especificidad.

¿Cuánto tiempo tardan los resultados de la citometría de flujo??

Estos patrones se comparan con patrones normales para determinar la importancia de los resultados. La prueba dura aproximadamente tres horas y consiste en teñir las células, adquirir las células en un citómetro de flujo y luego hacer que un técnico calificado analice los resultados que se han guardado en un archivo de computadora.

¿Cómo se compensa la citometría de flujo??

Cómo compensar correctamente un experimento de citometría de flujo de 4 colores

1. 4 pasos para compensar un experimento de 4 colores. ...
2. Elija el transportista correcto para la compensación. ...
3. Paso 2: recopile los datos y asegúrese de que haya una cantidad suficiente de eventos. ...
4. Calcule la compensación correctamente. ...
5. Aplicar los valores de compensación e inspeccionar los resultados..