protocolo de cultivo celular de tripsina edta

Procedimiento

1. Retire el medio del recipiente de cultivo por aspiración y lave la monocapa con una solución salina libre de Ca²⁺ y Mg²⁺ para eliminar todo rastro de suero. ...
2. Dispense suficiente tripsina o solución de tripsina / EDTA en los recipientes de cultivo para cubrir completamente la monocapa de células y colóquela en una incubadora a 37 ° C durante ~ 2 minutos..

1. ¿Cómo se prepara la solución de tripsina EDTA para cultivo celular??
2. Por qué se usa tripsina EDTA en cultivo celular?
3. ¿Cómo se realiza el subcultivo de células adherentes utilizando tripsina EDTA y EDTA solo??
4. ¿Cómo se descongela la tripsina EDTA??
5. ¿Puede la tripsina matar células??
6. ¿Qué podemos agregar al cultivo para inhibir la tripsina??
7. ¿Puede el EDTA matar células??
8. ¿Por qué el suero inhibe la tripsina??
9. ¿Es el EDTA tóxico para las células??
10. ¿Por qué usamos tripsina??
11. ¿Por qué lava las células con PBS??
12. ¿Por qué se lavan las células con PBS antes de agregar tripsina??

¿Cómo se prepara la solución de tripsina EDTA para cultivo celular??

Agregue de 12 a 15 ml de medio de cultivo celular fresco a un nuevo matraz y equilibre este medio con el pH y la temperatura adecuados. Recoger la suspensión celular, contarla y / o dividirla y dispensar las células en el matraz recién preparado. Consulte la hoja de producto de la línea celular para conocer las proporciones de subcultivo recomendadas..

Por qué se usa tripsina EDTA en cultivo celular?

El EDTA actúa como un quelante de metales, que se agrega a las soluciones de tripsina para mejorar la actividad. Se agrega EDTA para eliminar el calcio y el magnesio de la superficie celular, lo que permite que la tripsina hidrolice enlaces peptídicos específicos. La razón principal de usar el EDTA junto con la tripsina es eliminar la adhesión de célula a célula..

¿Cómo se realiza el subcultivo de células adherentes utilizando tripsina EDTA y EDTA solo??

Pipetee tripsina / EDTA sobre la monocapa de células lavadas usando aproximadamente 1 ml por cada 25 cm2 de superficie. Gire el matraz para cubrir la monocapa con tripsina. Decante el exceso de tripsina. Regrese el matraz a la incubadora y déjelo por 2-10 minutos..

¿Cómo se descongela la tripsina EDTA??

Retire la solución de tripsina / EDTA del almacenamiento y colóquela durante la noche entre 2 ° C y 8 ​​° C. 2. Transfiera la botella a un baño de agua a 37 ° C y agite suavemente la botella para mezclar los solutos. No mantenga la solución de tripsina / EDTA a 37 ° C más de lo necesario.

¿Puede la tripsina matar células??

La incubación de células con una concentración demasiado alta de tripsina durante un período de tiempo demasiado prolongado dañará las membranas celulares y las matará..

¿Qué podemos agregar al cultivo para inhibir la tripsina??

La tripsina es inhibida por el suero que proporciona los cationes divalentes como el calcio y el magnesio, que desempeñan un papel en el proceso de señalización intra e intercelular, es decir, en la formación de CAM, por lo que el suero generalmente se agrega al contenedor una vez que las células se han desprendido; esto se puede confirmar mediante observación bajo un microscopio.

¿Puede el EDTA matar células??

una. Use 5 mM de EDTA o más NOTA: demasiado EDTA puede matar sus células b. Accutase y Accumax son productos de disociación celular vendidos por Innovative Technologies que pueden ayudar a mantener suspensiones unicelulares..

¿Por qué el suero inhibe la tripsina??

Hola, la tripsina es una endopeptidasa que digiere proteínas. En el proceso de tripsinización se digieren las proteínas extracelulares, lo que conduce al desprendimiento de las células del fondo del recipiente de cultivo. ... El suero contiene muchos inhibidores de proteasa, que detienen la tripsina, principalmente alfa-1-antitripsina. Espero que esto ayude!

¿Es el EDTA tóxico para las células??

No se observó toxicidad cuando las células se expusieron a 100 microM de Zn o Fe-EDTA, pero la misma concentración de Cu-EDTA fue tan tóxica como Na-EDTA. La exposición continua de los cultivos celulares a 5 microM de Na- o Zn-EDTA durante un máximo de 7 semanas no dio indicios de toxicidad..

¿Por qué usamos tripsina??

La tripsina es una enzima que nos ayuda a digerir las proteínas. En el intestino delgado, la tripsina descompone las proteínas, continuando el proceso de digestión que comenzó en el estómago. También puede denominarse enzima proteolítica o proteinasa. La tripsina es producida por el páncreas en una forma inactiva llamada tripsinógeno..

¿Por qué lava las células con PBS??

En cultivo celular, durante la dispersión con PBS, se necesita un lavado para eliminar el suero del medio de modo que la tripsina pueda separar las células de la placa, de lo contrario, el suero puede inactivar la tripsina..

¿Por qué se lavan las células con PBS antes de agregar tripsina??

Antes de agregarlo a las células, debe lavar el medio de cultivo celular, ya que la tripsina también descompondría las proteínas que están presentes en el medio, como el FCS, reduciendo su actividad antes de que llegue a las células..